PEMBUATAN MEDIA EMBA DAN MCA

Tanggal Praktikum      : 19 Desember 2014

            II.            Judul Praktikum            : Pembuatan Media EMBA dan MCA

            III.            Tujuan Praktikum        : Untuk mengetahui cara pembuatan media EMBA dan MCA

            IV.            Landasan Teori

Media adalah suatu bahan yang terditri atas campuran zat – zat hara ( nutrein ) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Dengan menggunakan bermacam – macam media dapat dilakukan isolasi, perbanykan, pengaujan sifat fisiologis dan perhitungan sejumlaf mikroba.  Supaya mikroba dapat tumbuh baik dalam suatu media, maka medium tersebut harus memenuhi syarat – syarat antara lain :

Ø  Harus mengandung semua zat hara yang mudah digunakan oleh mikroba

Ø  Harus mempunyai tekana osmosis

Ø  Tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang akan tumbuh

Ø  Tidak mengandung zat – zat yang dapat menghambat pertumbuhan  mikroba

Ø  Harus berada dalam keadaan steril sebelum digunakan agar mikroba yang ditumbuhkan dapat tumbuh  dengan baik. ( sutedjo, 1990 ).

Media EMBA ( Eosin Methylen Blue Agar ) mempunyai keistimewaan mengandung laktosa dan berfungsi untuk memilih mikroba yang memfermentasikan laktosa seperti staphylococcus aureus, P. aerugenosa dan salmonella. Mikroba yang memfermentasikan laktosa akan menghasilkan koloni dengan inti berwarna gelap dengan kilap logam. Sedangkan mikroba lain yang dapat tumbuh koloninyan tidak berwarna. Adanya eosin dan methylen blue membantu mempertajam perbedaan tersebut. Namun demikian, jika media ini digunakan pada tahap awal Karena kuman lainnya juga tumbuh terutama P. aerugenosa dan salmonella sp. Dan dapat menimbulkan keraguan. Emba yang menggunakan eosin dan methylen blue sebagai indicator memberikan perbedaan yang nyata antara koloni yang meragikan laktosa dan tidak meragikan laktosa. ( Hastowo, 1992).

MCA ( Mac Conkey Agar ) adalah media selektif dan defferensial yang digunakan untuk isolasi dan differensiasi non pemilih gram negative batang, khusunya anggota Enterobacteriaceae keluarga dan genus Pseudomonas. Dimasukkannya violet Kristal dan garam empedu di media mencegah pertumbuhan bakteri gram positif dan rewel bakteri gram negative, seperti Neisseria dan Pasteurella. Teloransi bakteri gram negative enteric untuk empedu sebagian merupakan hasil dari membrane luar yang relative empedu tahan yang menyembunyikan empedu sensitive membrane sitoplasma. ( Nikaido, 1996 ).

    V.            Alat Dan Bahan

1.      Alat yang digunakan :

1.      Autoclave

2.      Batang Pengaduk

3.      Bunsen

4.      Cawan Petri

5.      Erlenmeyer 250 ml

6.      Gelas Kimia

7.      Gelas Ukur 100 ml

8.      Indicator pH

9.      Neraca Digital

10.  Sendok Tanduk

11.  Waterbath

2.      Bahan yang digunakan :

1.      Aquadest

2.      Eosin Methylen Blue Agar ( EMBA )

3.      HCL

4.      Kapas

5.      Mac Conkey Agar ( MCA )

 VI.            Perhitungan

1.      Pembuatan media EMBA :

37,4 gram              1000 ml

X gram                100 ml

37,4 x 100                     3740                                       

                     1000             1000   

               X = 3, 74 gram

2.      Pembuatan media MCA :

50 gram             1000 ml

X gram                150 ml

50 x 150           7.500      

  1000                 1.000

X = 7,5 gram

VII.            Prosedur Kerja

1.      Prosedur Kerja Pembuatan Media EMBA :

1.      Disiapkan alat dan bahan

2.      Ditimbang EMBA menggunakan gelas kimia sebanyak 3,74 gram pada neraca digital

3.      Dipindahkan kedalam Erlenmeyer

4.      Dibilas sisa EMBA dalam gelas kimia dengan menggunakan aquadest sebanyak 3 kali sampai tidak tersisa lagi kemudian dimasukkan kedalam erlenmeyer

5.      Dilarukan dalam 100 ml aquadest

6.      Dikocok hingga larut

7.      Diukur pH larutan menggunakan indicator pH sampai mendapatkan pH yang ditentukan

8.      Ditutup  Erlenmeyer menggunakan kapas

9.      Dihomogenkan dalam waterbath

10.  Disterilisasi menggunakan autoclave dengan suhu 121° C selama 15 menit

11.  Dituang media dalam cawan petri

12.  Dibiarkan media membeku kemudian dibungkus menggunakan kertas putih dengan cara dibalik

13.  Dimasukkan kedalam lemari pendingin.

2.      Prosedur Kerja Pembuatan media MCA :

1.      Disiapkan alat dan bahan

2.      Ditimbang MCA menggunakan gelas kimia sebanyak 7,5 gram pada neraca digital

3.      Dipindahkan kedalam Erlenmeyer

4.      Dibilas sisa MCA dalam gelas kimia menggunakan aquadest sebanyak 3 kali sampai tidak tersisa lagi kemudian dimasukkan kedalam erlenmeyer

5.      Dilarutkan dalam 150 ml aquadest yang telah diukur pHnya terlebih dahulu

6.      Ditutup Erlenmeyer menggunakan kapas

7.      Disterilisasi menggunakan autoclave dengan suhu 121° C selama 15 menit

8.      Dituang media dalam cawan petri

9.      Dibiarkan media membeku kemudian dibungkus menggunakan kertas putih dengan cara dibalik

10.  Dimasukkan kedalam lemari pendingin

VIII.            Kesimpulan

                   Media EMBA mengandung laktosa yang berfungsi untuk memilih mikroba yang memfermentasikan laktosa dan media ini termasuk dalam media differensial sedangkan media MCA merupakan media selektif dan differensial kerena digunakan untuk isolasi dan differensiasi non pemilih gram negative batang.

 IX.            Saran

                   Dalam pembuatan media sebaiknya diperhatikan pHnya sesuai dengan keterangan yang ada pada media agar mikroba yang ditumbuhkan dapat tumbuh dengan baik.